PNA(Peptide nucleic acid,肽核酸)是一種人工合成的類似于DNA,RNA的化學(xué)物質(zhì)。PNA的骨架是由重復(fù)的N-2-(氨乙基)-甘氨酸為單位,經(jīng)由肽鍵組合而成。堿基與骨架之間是以亞甲羧鍵相連。與多肽相似的是,PNA也有N端和C端的差別。同時(shí)由于PNA沒有如DNA,RNA上的磷酸基團(tuán),因此PNA與DNA,RNA之間缺乏電性相斥的現(xiàn)象,使得兩者之間的結(jié)合強(qiáng)度大于DNA與DNA之間的結(jié)合。由于PNA既不屬于多肽,也不屬于核酸,因此,PNA不易被蛋白酶或核酸酶水解,無論在體內(nèi)還是在體外,PNA都相當(dāng)穩(wěn)定,同時(shí),由于堿基之間配對(duì)特異性極強(qiáng),熱穩(wěn)定性高;诖嗽,PNA可以有如下應(yīng)用:
Globin
Reduction PNA: 血液中的globin mRNA占總mRNA的70%以上,會(huì)嚴(yán)重影響non-globin mRNA的擴(kuò)增。在進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄以及隨后PCR 擴(kuò)增的過程中,PNA均可以用作序列特異的blocker,阻止globin的反應(yīng),從而使non-globin mRNA更容易被擴(kuò)增出來。
PNA
Mutyper: 結(jié)合PNA Clamp以及Real Typer技術(shù),基于對(duì)Real-time PCR溶解曲線(Melting curve)分析,高效鑒別突變位點(diǎn)及突變類型。
針對(duì)wild type DNA
sequences設(shè)計(jì)PNA clamp probe,阻止wild type DNA擴(kuò)增,針對(duì)mutant type DNA sequence設(shè)計(jì)含有fluorescent dye以及quencher的PNA detection probe,通過real-time PCR的melting curve鑒別突變位點(diǎn)。
由于PNA自身特性,PNA Mutyper能夠準(zhǔn)確高效鑒別低至一個(gè)位點(diǎn)的突變。
PNA Real
Typer: 結(jié)合PNA Clamp以及Real Typer技術(shù),基于對(duì)Real-time PCR溶解曲線(Melting curve)分析,高效鑒別突變位點(diǎn)及突變類型。
針對(duì)wild type DNA
sequences設(shè)計(jì)PNA clamp probe,阻止wild type DNA擴(kuò)增,針對(duì)mutant type DNA sequence設(shè)計(jì)含有fluorescent dye以及quencher的PNA detection probe,通過real-time PCR的melting curve鑒別突變位點(diǎn)。
由于PNA自身特性,PNA Mutyper能夠準(zhǔn)確高效鑒別低至一個(gè)位點(diǎn)的突變。
PNA
miRNA inhibitors: PNA與RNA的結(jié)合能力比DNA與RNA的結(jié)合能力強(qiáng),因此 PNA 可以與相互配對(duì)的 miRNA 特異性結(jié)合,從而抑制 miRNA自身的調(diào)控作用。同時(shí),我們將細(xì)胞穿膜肽(Cell penetrating
peptides, CPPs) 與 PNA miRNA
Inhibitors相連,這樣,無需轉(zhuǎn)染試劑盒,PNA miRNA inhibitors即能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),達(dá)到抑制目標(biāo)miRNA的目的。已有研究證明PNA miRNA Inhibitors 是體內(nèi)試驗(yàn)的有效工具。
PNA
Clamp Kit: PNA Clamp技術(shù)是指PNA能夠?qū)R恍缘呐c野生型DNA結(jié)合,從而使野生型DNA不能作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增;而突變型DNA,由于堿基的缺失或突變,PNA不能與其結(jié)合,從而使突變型DNA能夠進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
PNA FISH
Probes: PNA能夠作為特異探針應(yīng)用于基因檢測(cè)。與DNA探針相比,PNA探針序列更短,所需濃度更低,雜交速度更快。并且PNA探針不帶電荷,生物穩(wěn)定性極高,特異性、親和性和細(xì)胞通透性都比DNA更高,PNA在雜交中的高穩(wěn)定性和對(duì)錯(cuò)配的高度分辨力使其具有作為探針的明顯優(yōu)勢(shì)。